甘草提取物对团头鲂生长性能、体组成、脂肪沉积的影响

材料与方法

1.1甘草提取物的制备

本试验采用水提醇沉法对甘草进行提取，参照文献[15]并加以改进。将甘草片（购于药房）置于8倍体积含氨 0.50% 的10%乙醇溶液中，于80 ℃下水浴回流提取，然后进行抽滤取滤液，并将滤液在旋转蒸发仪中真空浓缩至原体积的12.5%。在磁力搅拌器剧烈搅拌的条件下滴加稀释过的硫酸（濃硫酸 ∶超纯水体积比1 ∶1），并用pH计将溶液pH值调节至1.5～2.0，静置3 h，减压过滤，用水洗涤滤饼使其pH值达到3.5～4.0，真空干燥得到甘草提取物，研磨成粉，于 4 ℃ 下保存。参考刘翠哲等的方法[16]，采用全自动高效液相色谱法检测得到甘草提取物中甘草次酸的含量为2.14%。

1.2试验饲料

本试验以鱼粉、豆粕、棉粕、菜粕、鱼油、豆油、面粉、麸皮、复合预混料、磷酸二氢钙配制成等氮等能的基础饲料（表1）。分别在基础饲料中添加0、0.3、0.6 g/kg的甘草提取物，折算成甘草次酸含量分别为0、6.42、12.84 mg/kg。将各种原料按配方所需进行称质量、粉碎，逐级混匀后采用小型制粒机制成粒径约为2 mm的沉性颗粒料，常温晾干后置于-20 ℃冰箱中保存备用。

1.3饲养管理

本试验于南京农业大学水产教学科研基地进行，试验开始前将团头鲂暂养于池塘大网箱中，并用商品饲料进行驯化。暂养1周后，选择活力稳定、规格整齐、质量为（100.55±0.21）g的团头鲂240尾，并将其随机分为3组，每组设4个重复，每个重复20尾。试验于12个网箱中开展，网箱规格为2.0 m×1.0 m×1.2 m。分别用添加了0、0.3、0.6 g/kg甘草提取物的3组饲料投喂8周。每天分别于07：00、11：30、16：00 投喂3次，根据各网箱全部鱼体质量的3%～5%确定日投喂量。每天测定网箱内的水温、溶解氧、pH值。保持池塘内有微流水，定期清洗网箱以确保网箱内外水质良好。养殖期间将条件保持在水温（29±2）℃、溶解氧大于3.9 mg/L、pH值7.1～7.6。

1.4样品制备

饲养8周后，以网箱为单位统计每个网箱中鱼的尾数，并称量鱼的总质量。每箱随机取鱼5尾，分别称量个体质量并测量体长，用质量浓度为100 mg/L的MS-222麻醉。尾静脉采血并置于预先制备好的肝素抗凝管中，静置，于4 ℃、3 000 r/min 条件下离心10 min，取上清血浆样品。取3尾鱼，在冰盘上解剖并分离出肝胰脏、腹脂，另取3尾分离得到内脏团和胴体。采用4 ℃预冷的生理盐水分别清洗各组织，用滤纸吸干水分，称量内脏团质量、肝胰脏质量、腹脂质量、胴体质量，计算脏体比、肝体比、腹脂率、胴体率。将所得肝脏、腹脂、肌肉样品均置于-20 ℃冰箱中保存待测。

1.5测定指标及方法

生长性能、形体指标的计算公式如下。增质量率=（末均质量-初始均质量）/初始均质量×100%；特定生长率=（ln末均质量-ln初始均质量）/养殖天数×100%；饲料系数=投饵量/（末均质量-初始均质量）；脏体比=内脏质量/全鱼质量×100%；肝体比=肝脏质量/全鱼质量×100%；腹脂率=腹脂质量/全鱼质量×100%；胴体率=胴体质量/全鱼质量×100%；肥满度（g/cm3）=鱼体质量/鱼体长3。

饲料、全鱼水分含量采用105 ℃烘干法测定，粗蛋白质含量采用FOSS KT260型凯氏定氮仪测定，粗脂肪含量采用索氏抽提法测定，粗灰分含量采用550 ℃灼烧法测定，总能采用Parr 1281型氧弹测热仪测定。肌肉、肝脏的脂肪含量参照Folch等的氯仿-甲醇抽提法[17]进行测定。

1.6数据处理

试验结果以“平均值±标准误”表示。采用SPSS 19.0软件进行单因素方差分析（One-Way ANOVA），并用Duncans多重比较法分析试验结果间的差异，差异显著水平设定为α=0.05。

2结果与分析

2.1甘草提取物对团头鲂生长性能和形体指标的影响

饲料中添加甘草提取物后，各试验组之间的初始均质量、末均质量、增质量率、饵料系数、特定生长率均无显著差异（P>0.05）（表2）。各添加组的脏体比、肝体比、腹脂率、肥满度均低于对照组，添加0.3、0.6 g/kg甘草提取物组的肝体比、脏体比显著低于对照组（P<0.05）；添加0.6 g/kg甘草提取物组的肥满度显著低于对照组（P<0.05）；各组之间的胴体率均无显著差异（P>0.05）（表3）。

2.2甘草提取物对团头鲂体组成及肝脏、肌肉脂肪含量的影响

饲料中添加甘草提取物后，全鱼粗脂肪含量有所下降，但整体来看对全鱼体组成无显著影响（P>0.05）。试验组饲料

中添加甘草提取物后，肝脏脂肪含量与对照组相比显著下降（P<0.05），其他各组间的肝脏脂肪含量没有显著差异（P>0.05）（表4）。各添加组的肌肉脂肪含量均显著低于对照组（P<0.05），但各添加组之间无显著差异（P>0.05）。

2.3甘草提取物对团头鲂血脂的影响

饲料中添加甘草提取物后，各组的血浆甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、游离脂肪酸（NEFA）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量均显著低于对照组（P<0.05），但各添加组之间的TG、TC、NEFA含量无显著差异（P>0.05）。低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量随着甘草提取物添加量的增加而显著升高（P<0.05）（表5）。

3结论与讨论

3.1甘草提取物对团头鲂生长性能、体组成的影响

甘草及其提取物作為中草药免疫调控剂被广泛应用于人和动物。He等在仔猪饲料中添加甘草次酸，显著提高了仔猪的增质量率[8]。在水产动物中，甘草提取物可提高凡纳滨对虾[18]、鳜[19]、刺参[20]的生产性能。但Xu等在大黄鱼饲料中添加甘草酸后，增质量率无显著差异[9]。Jiang等在斑点叉尾的研究中发现，在饲料中添加0.3～0.6 mg/kg甘草次酸显著提高了采食量，但对生长无显著影响；0.9 mg/kg甘草次酸使试验鱼的增质量率下降[12-13]。肖文权研究表明，在番鸭饲粮中添加甘草提取物能够极显著提高番鸭的平均日增质量[21]。张瑞等研究发现，将甘草残渣作为饲料添加剂可显著提高番鸭的生产性能[22]。陈效儒等研究表明，饲料中添加甘草酸可提高刺参养殖的产量[23]。张洪玉等研究表明，饲料中添加甘草能够促进鲟生长[24]。本研究结果表明，在饲料中添加甘草提取物对团头鲂生长没有促进作用，但也不会影响其生长，此结论与Xu等[9]、Jiang等[12-13]、蔡东森等[14]的研究结论相似。这可能是甘草次酸的促进氨基酸代谢[25]、增强免疫[20]、降低脂肪沉积[26]、调节激素分泌[27]等多种作用共同发生所导致，可能与试验环境、试验动物、添加剂量等有关。

3.2甘草提取物对团头鲂鱼体脂肪沉积的影响

脂肪是鱼体内的重要贮能物质，其吸收、合成、转运、储存、分解供能处于平衡状态。过多脂类、糖类等能量物质的摄入以及环境因子的变化均会导致肝脏中的过度沉积，不利于水产动物的生长，并降低鱼类的抗应激能力。在人体上的研究表明，外敷甘草次酸能够有效促进脂肪分解并降低脂肪沉积[20，25]。Wu等对试验大鼠饲喂甘草次酸，结果显示，添加甘草次酸组的肝脏脂肪含量显著低于未添加甘草次酸的对照组，并推测该作用可能是由于甘草次酸促进了线粒体中脂肪酸的氧化过程[28]。蔡东森等研究表明，饲料中添加0.30～0.45 g/kg 的甘草次酸可降低团头鲂内脏中脂肪的沉积[14]。Jiang等对斑点叉尾的研究发现，甘草次酸通过调控鱼体皮质醇含量促进脂肪分解[13]。本研究结果表明，在饲料中添加甘草提取物可显著降低团头鲂肝脏及肌肉的脂肪含量，这与上述已有研究相符合，表明使用甘草提取物取代甘草次酸纯品同样能够达到降脂效果。然而甘草中活性成分能够降低肝脏脂肪含量的机制尚不明确，可能的原因有：甘草次酸促进了肝脏脂肪酸在线粒体中的氧化分解[28]，从而增加了脂肪分解功能的消耗；甘草次酸通过提高动物体内皮质醇水平，增强了动物体的分解代谢，最终促使脂肪含量降低[29-30]。此外，本研究结果还表明，甘草提取物可降低团头鲂的脏体比、肝体比、腹脂率；在对斑点叉尾的研究中也发现，在饲料中添加甘草次酸显著降低了鱼体的肝体比、脏体比、腹脂率[12]，这可能与内脏团整体脂肪含量的降低有关。基于以上结果推测，甘草提取物因含有效成分甘草次酸而具有减少鱼体脂肪沉积的作用。

血液是魚体营养物质及代谢产物的运输载体，血脂水平可反映机体脂肪的代谢情况。动物体内血脂的异常在脂肪肝早期具有重要诊断意义，而鱼类血脂水平的变化也与鱼类肝脏脂肪化具有极大的相关性[31]。高密度脂蛋白（HDL）是血液中胆固醇的清理者，携带胆固醇后形成HDL-C；低密度脂蛋白（LDL）则以与前者相反的方向输送胆固醇，携带后形成LDL-C，血液中的LDL-C是血浆中主要携带总胆固醇（TC）的载脂蛋白[32]。本试验在饲料中添加甘草提取物后，试验组的甘油三酯、总胆固醇、游离脂肪酸、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量均显著降低，低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量则显著升高。根据2种脂蛋白的作用，血液中HDL-C含量降低、LDL-C含量升高意味着胆固醇从血液进入到肝脏中的量减少，与此同时由肝脏向血液输送的胆固醇增多，因此LDL携带胆固醇形成LDL-C的含量增多，最后通过二者的相互调节，导致血液中的总胆固醇含量降低。孟富敏等研究表明，甘草次酸钠可使动物血脂明显降低[33]。可见，甘草提取物具有较强烈的降血脂作用，甘草次酸可能通过这种作用降低了血浆脂肪含量，抑制了脂肪的转运，减少了脂肪在内脏组织中的沉积。

甘草提取物能够起到调节脂肪代谢的作用，对团头鲂的生长无显著影响，但可通过调节血脂来影响团头鲂体内的脂肪代谢，从而起到一定的降脂作用。

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doi：10.15889/j.issn.1002-1302.2017.06.039

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